Pemeriksaan Lab Hiv,vl,cd4 6v1

PEMERIKSAAN LABORATORIUM INFEKSI HIV

MISUTARNO UNIT PERAWATAN INTERMEDIATE PENYAKIT INFEKSI RSUD Dr. Soetomo Surabaya

PEMERIKSAAN LABORATORIUM Tujuan :

1. 2. 3. 4.

Untuk menegakkan diagnosis Pengamanan darah transfusi Transplantasi jaringan Untuk menentukan angka kesakitan infeksi HIV & AIDS melalui surveilans 2

Protap Laboratorium terdiri dari I.

Diagnosis Infeksi HIV Pemeriksaan anti-HIV II. Pengobatan ARV (ART) Untuk menentukan awal dan pemantauan pengobatan 1. Pemeriksaan jumlah CD4 2. Beban Virus (Viral Load) HIV 3

Lanjutan…… III. Infeksi

oportunistik

1. Mycobacterium tuberculosis (MT) dan NonTuberculous Mycobacteria (NTB) 2. Bakteri lain pada pemeriksaan dengan spesimen : darah, urin, feses, Cairan otak, pus, sputum 3. Mikosis 4. Parasit 5. Virus 4

Lanjutan…… IV. Pemeriksaan penunjang lain untuk pemberian ART 1. Darah rutin 2. Hati : SGOT, SGPT, Bilirubin 3. Ginjal : Ureum, kreatinin

4. Kolesterol, trigliserida 5

Struktur morfologi HIV-1 Schochetman, 1994 6

Tabel 1. Protein pada HIV-1 dan HIV-2

Inti

HIV-1

HIV-2

p 24

p 26

Transmembran gp 41

gp 34

Membran luar

gp 140

gp

160/ 120

7

PEMERIKSAAN ANTIBODI - HIV - Metode yang dianjurkan digunakan :

deteksi antibodi - Antibodi terbentuk  3 - 6 minggu  bisa sampai 3 – 6 bulan - Antibodi HIV positif  terinfeksi HIV - Paling efisien dan luas pemakaiannya 8

METODE PEMERIKSAAN HIV Ada beberapa macam metode : - Uji Elisa - Uji sederhana / cepat

- Uji Western Blot 9

Tes konfirmasi 1.Western Blot (WB)

2. Indirect immunofluorescence

asssays (IFA) 3. Radioimmunoprecipitation assays (RIPA) 10

Bagan alur strategi pemeriksaan HIV Tujuan pemeriksaan

Prevalensi infeksi

Keamanan transfusi/ transplantasi

Semua prevalensi

Surveilans

Diagnosis

Faktor risiko

Strategi pemeriksaan I

>10% ≤ 10%

I II

Terdapat gejala klinik infeksi HIV

>30%

+

I

≤ 30%

-

II

Tanpa gejala klinik infeksi HIV

>10%

+

II

≤ 10%

-

III

Dikutip dari Depkes Dirjen Bina Pelayanan Medik Direktorat Bina Pelayanan Penunjang Medik, 2006

11

Standar alur pemeriksaan (1) • Saat ini prevalensi infeksi HIV di berbagai

• •

propinsi di Indonesia berbeda-beda, namun secara keseluruhan masih di bawah 5% → direkomendasikan strategi III untuk keperluan diagnosis yang asimtomatik. pemeriksaan uji saring untuk keamanan transfusi darah dan transplantasi digunakan strategi I Untuk tujuan surveilans digunakan strategi II 12

Standar alur pemeriksaan (2) • Pemeriksaan HIV harus disertai dengan

informed consent tertulis dari orang yang

•

diperiksa atau bila tidak memungkinkan karena penderita di bawah umur dewasa atau tisak sadar, maka dapat dimintakan dari keluarga terdekatnya Sebelumnya didahului dengan konseling pra-uji/tes dan sesudah pemeriksaan diberikan konseling pasca-uji/tes

13

Standar alur pemeriksaan (3) • Informed consent tidak diperlukan jika pemeriksaan dilakukan secara

unlinked anonymous untuk keperluan surveilans HIV dari spesimen-spesimen yang diambil dari keperluan lain 14

Diagnosis pasien asimtomatik harus menggunakan strategi III dengan persyaratan reagensia :

Sensitivitas reagen pertama > 99% Spesifisitas reagen kedua > 98% Spesifisitas reagen ketiga > 99% Preparasi antigen atau prinsip tes reagen 1,2,3 : tidak sama 15

• Untuk tujuan surveilans Reagen I : sensitivitas > 99%

Reagen II : Spesifisitas > 98%

• Semua reagensia yang dipakai harus sudah terdaftar pada Departemen Kesehatan Republik Indonesia dan mengacu pada buku Hasil Evaluasi Reagensia HIV di Indonesia tahun 2006 oleh Departemen Kesehatan 16

PEMERIKSAAN LABORATORIUM Penderita  Curiga terinfeksi HIV  Konseling pre-tes 

Informed consent

 Tes darah  Konseling pasca-tes hasil positif / negatif Harus rahasia 17

Alur pemeriksaan anti-HIV untuk penyaring darah donor & transplantasi organ A1 A1 positif

Anggap sebagai “positif”

A1 negatif

Anggap sebagai “negatif”

Jangan dipakai !! 18

Strategi II

A1

Surveilans, Diagnosis A1 +

A1 -

Laporkan negatif

A2

A1+A2Ulangi A1 dan A2

A1+A2+

Laporkan positf

A1+A2+ Laporkan positf

A1+A2Laporkan indeterminate

A1-A2Laporkan negatif 19

A1

Strategi III

A1 +

Diagnosis

A1 -

Laporkan negatif

A2

Anggap indeterminate

Anggap Negatif

A1+A2+

A1+A2Ulangi A1 dan A2

Risiko tinggi

Risiko rendah

A1+A2+

A3

A1+ A2- A3-

A1+ A2+ A3-

A1+ A2- A3+

A1+A2-

A1-A2Laporkan negatif

A1+ A2+ A3+ Laporkan positf

Anggap indeterminate

20

Catatan penting : • Untuk individu yang “baru” didiagnosis → hasil

• •

reaktif harus dikonfirmasi dengan melakukan pemeriksaan ulang dengan bahan baru → sedikitnya 14 hari setelahnya Untuk hasil indeterminate → perlu diulang dengan bahan baru yang diambil sedikitnya 14 hari sesudah pemeriksaan yang pertama → konfirmasi WB Bila hasil tetap indeterminate dengan bahan baru → lakukan pemantauan ulang pada 3,6, atau 12 bulan. Bila setelah 12 bulan hasil tetap “indeterminate”→ tidak terinfeksi HIV 21

PERIKSAAN ANTI HIV 3 METODE • METODE 1 : Oncoprobe

HIV 1/2

• METODE 2 : Triline HIV 1/2 • METODE 3 : Standar Defiasi (SD) HIV ½

22

Cara kerja • Pemakaian alat pelindung diri – Sarung Tangan – Apron – Masker

23

Cara kerja

• Ambil darah vena 3 cc

Masukkan darah dalam Tabung steril tanpa coagulan

24

Cara Kerja

• Letakkan tabung ke centrifuge selama 5 menit, dengan kecepatan 5000 rpm

25

Cara Kerja

• Ambil serumnya Teteskan serum pada obyek SD HIV ½ sebanyak 1 tetes 26

Cara Kerja

• Tambahkan SD HIV ½ 3 tetes, tunggu sebentar

• Baca, Positif bila ada garis merah pada obyek yang diperiksa

27

Cara Kerja

• Dilanjutkan dengan metode 2, tambahkan

oncoprobe 1 tetes pada serum obyek, baca ! 28

Cara Kerja

• Teteskan 1 tetes AQ pada serum obyek • Baca! 29

Cara Kerja

• Reaktif Bila ke 3 Metode hasilnya terlihat ada garis merah di obyek serum

30

31

Keterangan : Pemeriksaan HIV • Bahan darah dapat diambil setiap

saat • Volume darah ± 3 ml • Sebaiknya segera dikirim dan diproses, terutama untuk darah lengkap → 24 jam • Serum atau plasma dapat disimpan pada suhu 2-8oC selama 1 minggu • Pada suhu ≤ - 200C : serum atau plasma dapat bertahan lebih lama 32

PEMERIKSAAN CD4 & VIRAL LOAD 33

Pemeriksaan CD 4 • Petunjuk progresivitas penyakit pada infeksi HIV/AIDS • Penurunan jumlah CD4 menunjukkan tingkat kerusakan sistem kekebalan disebabkan HIV • Jumlah CD4 ≥ 500/ml atau ≥ 29% dari limfosit total → belum ada kerusakan berat • Jumlah CD4 < 200/ml (<14%) → kebanyakan stadium AIDS • Menentukan awal pengobatan • Memonitoring pengobatan ARV 34

Cara Kerja Pemeriksaan CD4 • Bahan : darah dengan K2EDTA/K3EDTA

35

Lanjutan…… Cara Kerja Pemeriksaan CD4 • Ambil darah vena 3 cc di masukkan dalam tabung K2EDTA/K3EDTA

36

Lanjutan…… Cara Kerja Pemeriksaan CD4 • Ambil darah 50 mikro masukkan tabung khusus • • • • •

BDTRUCON Ditambah 20 mikroliter antibodi Lalu di vortex (dicampur / digetarkan) selama 5 menit, di incubasi (biarkan) suhu kamar ditempat gelap selama 15 menit Ditambah 450 mikroliter cysing solution lalu di vortex selama 5 menit, di incubasi (biarkan) suhu kamar ditempat gelap selama 15 menit Lalu dibaca dengan alat BD Facs Calibur Hasil dibaca !!!!!! 37

Viral load (beban virus) • Menunjukkan tingginya replikasi HIV dan

kecepatan penghancuran CD4 • Tinggi-rendahnya viral load menunjukkan cepat-lambatnya perjalanan penyakit dan kematian • Memonitoring pengobatan • Memonitoring resistensi ARV 38

keterangan: Bahan pemeriksaan (CD4 & VL) • Pengambilan darah pada waktu yang sama • •

•

(diurnal variasi) Volume darah sesuai dengan tabung vakum Waktu pemeriksaan < 24 jam setelah pengambilan untuk CD4 Waktu pemeriksaan < 6 jam setelah pengambilan untuk VL → plasma segera dipisahkan

39

Kriteria penolakan bahan pemeriksaan • • • • • • •

Hemolisis Terdapat bekuan (clotting) Keruh (seharusnya jernih) Tidak disimpan dan dikirimkan dengan baik (tidak dingin) Tidak ditempeli label yang sesuai Penampungnya bocor Tidak menggunakan EDTA : CD4 & VL 40

Prosedur pengiriman spesimen • Tabung spesimen setelah diberi label → • •

• •

lapisi tutup tabung dengan parafilm Masukkan ke tempat tertutup/kantong plastik, di antaranya beri kapas/kertas koran Waktu pengiriman lama beri es/dry ice → terutama untuk VL (plasma) Sampel CD4 diperlukan es spy temp. 18220C Surat pengamtar : tanggal pengiriman, tanggal pengambilan, identitas

41

• Bungkus rapi, masukkan ke dalam tempat pengiriman • Bubuhkan alamat lengkap lab. yang dituju • Tulis bahan berbahaya

42

Contoh Hasil CD4 Jenis Pemeriksaan CD4 Absolut Count

Hasil

Nilai Rujukan

288 cells/µI

410 - 1590

43

Contoh Hasil Viral Load Jenis Hasil Pemeriksaan PCR HIV <400 kopi/ml

˜<204 IU/ml ˜ log <2,6

Nilai Rujukan < 400 kopi/ml <204 IU/ml

<2,6

Kesimpulan : HIV 1 RNA tdk terdeteksi 44

45