Kromatografi Preparatif 4p6i4e

Kromatografi Preparatif By: Kelompok 3 Farmasi C

Nama Kelompok • Dwi Putri Utami

(201410410311131)

• Hanan Rumaisah (201410410311146)

• Aulia Tamara

(201410410311134)

• Kukuh Adhe K.

• Alfira Aryanti

(201410410311136)

• Syafitri Anggiyani A. (201410410311150)

(201410410311148)

• Vivi Laily Kurniati (201410410311152) • Muhammad Husni A. (201410410311138) • Noviani • Dian Harianti Lestari (201410410311140)

• Vini Nurbaiti

(201410410311144)

(201410410311154)

• Anita Karlina (201410410311159) • Ari Nugroho Saputro (201410410311240)

Pengertian Kromatografi Preparatif Kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) merupakan metode pemisahan yang memerlukan biaya paling murah dan memakai peralatan sangat sederhana . Walaupun KLTP dapat memisahkan dalam jumlah gram,sebagian besar pemakaian hanya dalam jumlah miligram. KLT preparatif dilakukan dengan menggunakan lapisan tebal (sampai 1

Contoh Penelitian yang menggunakan KLTP

JURNAL 1

JURNAL III

JURNAL II

JURNAL IV

Preparative High-Performance Liquid Chromatography for the Purification of Natural Acylated Anthocyanins from Red Radish (Raphanus sativus L.) Jurnal 1

HPLC preparatif dilakukan dengan Glison Model 576 pompa dan kolom Cosmosil C18-AR-II, 20 mm x 250 mm, 5mcm) menggunakan MeOH-H20 dengan perbadingan 40:60 mengandung 0,1% TFA sebagai fase gerak. Laju alir 7mL/menit, dengan UVVis detektor lamba 520 nm. Kromatogram dihasilkan dari 10 frasi pada gambar di samping. Fraksi diketahui terkonsentrasi oleh evaporotary dan masing-masing fraksi dianalisis dengan HPLC analisis untuk memeriksa kemurnian sebelum karakterisasi.

Karya ini diarahkan isolasi preparatif dari anthocyanin dan karakterisasi mereka dengan spektroskopi teknik seperti NMR dan MS. Berikut cara mengidentifikasi anthocyanin •Setelah koleksi masing-masing fraksi,pelarut diuapkan di bawah vakum dan kemurnian diperiksa oleh HPLC analitis. Kemudian, fraksi dimurnikan oleh HPLC semipreparative. Kemudian dianalisis dengan 1H dan 13C NMR spektrometri untuk menghasilkan senyawa yang dikenal 110.Spektral data yang digunakan untuk karakterisasi anthocyanin yang dikumpulkan oleh semi-preparatif HPLC. FAB-MS data fraksi menyediakan bukti massa molekul. 1H dan 13C NMR Data anthocyanin ini kemudian dibandingkan dengan nilai yang dilaporkan dalam literatur anthocyanin.Kemudian sepuluh senyawa yang diketahui diidentifikasi lagi oleh analisis spektral dan dibandingkan dengan data yang dilaporkan (2,3)

Isolasi dan Karakterisasi Alkaloid dari Daun Sirih Merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav) Jurnal 2

Pemilihan Fase diam dan Fase Gerak Fase diam yang digunakan yaitu silika gel GF254 sedangkan fase gerak yang digunakan yaitu etil asetat 100%. Fraksi yang terpilih untuk di pantau adalah fraksi alkaloid netral atau basa lemah karena ketika di semprot dengan penampak noda dragendorff menimbulkan warna orange atau jingga yang sama dengan pembanding piperin. Kemudian di lakukan kromatografi cair vakum(KCV) untuk pemisahan lebih lanjut sehingga di hasilkan fraksi yang lebih sederhana. Fraksi yang terpilih pada metode ini adalah fraksi yang menunjukkan warna orange atau jingga lebih banyak di banding fraksi yang lain

Dari hasil penampak bercak pada pat KLT preparative, hanya pita 2 yang memberikan hasil positif alkaloid, sehingga pita 2 dikerok dan dilarutkan dalam methanol. Kemudian dibiarkan seama 24 jam, setelah itu disaring dan diuapkan. Selanjutnya dilakukan uji kemurnian terhadap isolate yang diperoleh dengan metode KLT pengembang tunggal dan KLT dua dimensi. Hasil dari uji kemunian menggunakan KLT dua dimensi dapat diketahui bahwa isolat hasil dari pemisahan KLT preparatif ini cukup murni, hal ini dilihat dari hasil bercak yang dihasilkan dari penggunaan KLT dua dimensi yang menghasilkan hanya satu bercak. Isolat murni tersebut kemudian dilakukan karaktrisasi isolat dengan menggunakan spektrofotometer UV-sinar tampak dan spektrofotometer inframerah.

Preparative Isolation of monogalactosyl and digalactosyl diglycerides by thin-layer chromatography Jurnal 3

Prosedur TLC • Ekstrak dipisahkan menjadi fraksi minyak mentah secara bertahap • Aseton sebagai fase gerak untuk pemurnian monogalactosyl digliserida (GDG) dan aseton-acetic acid-air untuk digliserida digalactosyl (DGDG) • Dilakukan penyemprotan plat dengan air maka lipid akan terdeteksi

Metode Analisis • Identifikasi galactolipid telah ditetapkan dengan deacylation dan hidrolisis asam yang mana diikuti dengan identifikasi glukosa dengan kromatografi kertas. • Komponen galaktosa dalam lipid telah dianalisis secara kuantitatif dengan metode radin, lavin dan brown dengan bantuan kurva standart galaktosa. • Komposisi asam lemak dari galaktolipid itu determinan dengan kromatografi gas-liquid dari metil ester. Tingkatan ester yang jenuh telah ditentukan menggunakan hidrogenasi dengan H2 dan Pt.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA PENANDA DARI DAUN JAKANG (Muehlenbeckia platyclada MEISSN) Jurnal 4

Prosedur kerja 1) Menghilangkan kotoran yang menempel pada daun Jakang kemudian dicuci sampai bersih. 2) Selanjutnya daun Jakang dijemur di bawah sinar matahari dengan ditutup kain hitam. 3) Setelah kering diserbuk sampai halus. Lebih kurang 50 g serbuk daun jakang dibebaskan dari senyawa yang kepolarannya rendah seperti lemak dan klorofil dengan cara soxhletasi. 4) Dibutuhkan sebanyak 200 mL petroleum eter sampai warna pelarutnya jernih. Sari petroleum eter yang diperoleh dipekatkan dengan pemanasan di atas penangas air.

lanjutan 5) Serbuk yang sudah diawalemakkan dengan petroleum eter, dikeringkan di udara bebas dalam cawan porselin besar. 6) Setelah kering disoxhletasi dengan kloroform 200 mL sampai pelarutnya jernih. Sari kloroform yang didapat dipekatkan dengan pemanasan di atas penangas air. 7) Selanjutnya, serbuk dikeringkan kembali di udara bebas dalam cawan porselin besar dan setelah kering disoxhletasi dengan etanol 96% 200 mL sampai pelarutnya jernih. Sari etanol yang diperoleh dipekatkan dengan pemanasan di atas penangas air.

lanjutan 8) Kemudian pada akhir fraksinasi diperoleh sari petroleum eter, kloroform, dan etanol. Sari petroleum eter, kloroform, dan etanol yang telah diuapkan dilarutkan dalam pelarut yang sesuai. 9) Terakhir dilakukan uji kromatografi lapis tipis menggunakan fase diam silika gel 60 F 254 dan fase gerak n-heksana - etilasetat (3:1) •) Dragendorf untuk mendeteksi senyawa golongan alkaloid, •) sitroborat untuk mendeteksi senyawa golongan flavonoid

HASIL • Setelah pemisahan secara KLT preparatif selesai, dilakukan pengerokan pada pita senyawa penanda yang akan diisolasi. • Bercak yang dikerok adalah bercak yang mempunyai harga hRf 47. Setelah bercak dikerok, kemudian hasil kerokan tersebut dilarutkan dalam metanol dan segera disaring menggunakan kertas saring. Penyaringan ini dimaksudkan untuk memisahkan senyawa yang terikat pada penyerap. • Filtrat yang diperoleh kemudian dikeringkan, sehingga diperoleh isolat yang berwarna kuning yang diduga sebagai senyawa golongan flavonoid dengan bobot sebesar 0,03 gram dan merupakan senyawa penanda pada daun jakang

lanjutan • Selanjutnya dilakukan uji kemurnian terhadap isolat dan diidentifikasi lebih lanjut menggunakan metode pereaksi geser dengan spektrofotometri UV-Vis. • Spektra UV dari isolat dalam metanol menunjukkan serapan maksimum pada panjang gelombang 327,2 nm dari pita I dan 279,5 nm dari pita II. • Dari informasi tersebut dapat ditafsirkan bahwa flavonoid tersebut termasuk golongan flavon karena masuk dalam daerah panjang gelombang 310-350 nm yang merupakan daerah pita I serta 250-280 nm yang merupakan daerah pita II.

TERIMAKASIH