_guia De Practicas - Toxicologia Y Quimica Legal Lizano 2017 4f6m6f

Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA 3B-2

GUÍA DE PRÁCTICAS

TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL

Autor:

Mg. Jesús Víctor Lizano Gutiérrez

LIMA – PERU 2017 1

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

2

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

INTRODUCCIÓN La Toxicología es una nueva ciencia que tiene diferentes áreas, ya no es solamente la Toxicología Forense, actualmente han cobrado importancia las áreas de la Toxicología ambiental, ocupacional, industrial, clínica, medicamentosa, cosmética, alimentaria, de urgencia, la ecotoxicología, la espacial, etc., por ello se da a conocer la presente Guía de Practicas del curso de Toxicología y Química Legal, como un instrumento que facilite la enseñanza experimental. Con ella queremos trasmitir a nuestros alumnos nuestra experiencia sobre los análisis toxicológicos básicos en lo que se refiere a la extracción, detección, identificación y cuantificación de las principales sustancias químicas que causan intoxicaciones, ya sea en muestras biológicas y no biológicas, teniendo en cuenta sus propiedades fisicoquímicas, las cuales, pueden producir intoxicación aguda o crónica; individual, colectiva o contaminación del medio ambiente que ocasione riesgo a la población. EL AUTOR

3

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

ANÁLISIS TOXICOLÓGICO Se define como el conjunto de medios técnicos y humanos donde se identifican, cuantifican y controlan los efectos de los tóxicos, teniendo en cuenta las propiedades químicas, físicas y biológicas de la sustancia estudiada. Importancia del análisis toxicológico El análisis toxicológico es de gran importancia en clínica no sólo como ayuda al médico en el diagnóstico y pronóstico de una intoxicación sino en la evolución del tratamiento, ya que con análisis de control subsiguientes dará idea al médico si el tóxico permanece en el organismo o ha desaparecido. En medicina legal igualmente es de suma importancia para la comprobación de un envenenamiento el identificar y cuantificar el tóxico en vísceras u otras muestras biológicas, ya que una intoxicación por accidental que parezca puede tener implicaciones médico-legales u obrero- patronales cuyo resultado depende de un análisis realizado o de una autopsia. Los laboratorios de toxicología se han especializado al igual que las áreas que cubre la Toxicología, por lo tanto existen varias clases como son:  Laboratorio de toxicología ambiental, desarrolla sus análisis en la identificación y cuantificación de sustancias tóxicas presentes en un ecosistema que puedan directa o indirectamente ocasionar riesgo a las personas, involucra análisis de aguas, alimentos, suelos y aire.  Laboratorio de toxicología industrial u ocupacional, que investiga las sustancias potencialmente tóxicas involucradas en los procesos de producción de empresas formales o informales, que de forma directa o indirecta puedan producir lesiones al individuo o afectar a la comunidad. En salud ocupacional es igualmente importante, ya que en esta época de gran desarrollo industrial cabe destacar la gran responsabilidad del laboratorio para detectar y cuantificar numerosos tóxicos de trabajadores expuestos por medio de examen de orina o sangre en su fase pre clínica, y en general en todo lo referente a las enfermedades profesionales.  Laboratorio de toxicología forense, que investiga las sustancias tóxicas que causan la muerte, o investiga los hechos legales donde se involucran sustancias Tóxicas.  Laboratorio de toxicología clínica, realiza los análisis básicos para él diagnóstico de sustancias químicas que causan intoxicaciones agudas las cuales deben ser procesadas en el laboratorio clínico de Toxicología a través de un análisis que permitan identificarlas en un tiempo corto para poder hacer un pronto diagnostico que permita dar un rápido tratamiento antidotico y salvar la vida del paciente intoxicado. Intoxicaciones y procedimientos más comunes en nuestro medio - Detección de sustancias utilizadas con fines delictivos (Escopolamina, Benzodiacepinas, Fenotiacinas, GHB). - Detección de Plaguicidas Órgano Fosforados, Órgano Carba micos y Órgano Clorados. - Análisis de Colinesterasa en casos de intoxicación por plaguicidas Organofosforados y carbamatos como prueba indirecta. - Drogas de abuso (Cocaína Cannabinoides, Opiáceos, Anfetaminas). 4

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Etanol, Metanol, Formaldehído. - Análisis de medicamentos como Barbitúricos, Fenobarbital, Carbamazepina, Fenitoína, Ácido Valproico. - Detección de Monóxido de Carbono, (Carboxihemoglobima). - Análisis de AINES y Antidepresivos Triciclicos. - Análisis de otras sustancias como Cianuro; Metales como Plomo, Mercurio, Talio, Cromo, Arsénico. - Identificación de tóxicos o del Animal Venenoso. - Sustancias Corrosivas: Ácidos y Álcalis (Blanqueadores y Detergentes). Los Análisis Químico Toxicológico trabajan en dos campos de Acción: LOS URGENTES: Cuyo análisis no es superior a un tiempo de cuatro horas y sus reportes son inmediatos, generalmente van dirigidos a médicos o instituciones de salud que están manejando un paciente intoxicado agudo. LOS DE MONITOREO O DIAGNÓSTICO: Cuyo tiempo puede llevar de 1 a 5 días generalmente son análisis de mayor complejidad y se realizan como apoyo de diagnóstico diferencial, de control terapéutico o investigación de campo, en estos casos no está de por medio la vida de una persona.

SISTEMATICA ANALITICA TOXICOLOGICA (SAT) Una Sistemática Analítica Toxicológica (SAT) puede definirse como el conjunto de procedimientos analíticos, concisos, bien planeados, encaminados a poner de manifiesto la presencia o ausencia de sustancias de relevancia toxicológica, en una muestra determinada. Comprende varias etapas: 1. Pretratamiento de las muestras: homogeneización, desproteinización, hidrólisis de conjugados, etc. 2. Extracción - purificación: extracción líquido-líquido (LLE), en fase sólida (SPE), en el espacio en cabeza (HSE), micro extracción en fase sólida (SPME), etc. 3. Análisis instrumental. Es deseable que la sistemática sea compatible con un elevado número de sustancias potencialmente tóxicas, aunque lo usual en un laboratorio de nivel superior es que para abordar el análisis de sustancias de muy diversa naturaleza como medicamentos, drogas de abuso, metales, plaguicidas, alcoholes, etc, se realicen más de una SAT, pues existen muchas sustancias no detectables mediante un único procedimiento. Los tóxicos más numerosos son compuestos orgánicos que pueden poseer carácter ácido, básico o ambos a la vez o ser sustancias neutras. Los tóxicos más volátiles (Alcohol etílico, metílico, etilenglicol, hidrocarburos derivados del petróleo y monóxido de carbono), requieren unos procedimientos analíticos especiales y distintos también de la SAT para los tóxicos inorgánicos (metales y aniones). Los diversos procedimientos analíticos se aplicaran según requerimiento del caso. Por ello la presente Guía de Practicas proporcionara a los alumnos los conocimientos básicos teórico. Practico para la identificación y cuantificación de los principales tóxicos que están ocasionando intoxicaciones agudas y que ponen en peligro la salud de las personas. 5

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

I. PRÁCTICA No. 1 y 2 ANALISIS TOXICOLOGICO. MANEJO DE LA MUESTRA PROBLEMA. TOMA, ENVIO Y RECEPCION 1.1 Marco teórico El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos es de gran interés criminalístico, requiere de un adecuado procedimiento en la toma de la muestra, en su fijación o preservación, embalaje y envío con la solicitud específica de lo que se desea determinar en el examen a informar, porque sus resultados servirán para una buena istración de justicia. 1.2 Competencias Explicar al alumno los objetivos e implicancias del Análisis Químico Toxicológico así como los diferentes tipos de muestras problemas y su procesamiento. Emplear el método descriptivo de asesoría permanente. - Identificar el tipo de intoxicación. Toma de las muestras para el análisis toxicológico - Enviar y recepcionar las muestras. Preparar los protocolos de envío y recepción de las muestras. Actitud del perito. - Procesamiento de los diferentes tipos de muestra para el análisis toxicológico adquiriendo los conocimientos para diferenciar los tipos de agentes tóxicos que pueden causar intoxicaciones. Cumplir y hacer cumplir las medidas de bioseguridad. 1.3 Materiales y equipos - Campana extractora. - Frascos de vidrio de boca ancha. - Equipo de disección. - Cinta adhesiva. - Muestras de alimentos, líquidos biológicos y otros. - Equipos de conservación en frio portátiles. 1.4 Procedimiento El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos de interés criminalistico, requiere de un adecuado procedimiento en la toma de la muestra, en su fijación o preservación, embalaje y envío con la solicitud específica de lo que se desea determinar en el examen a informar, para ello se hace necesario considerar lo siguiente: a.- Toda muestra de pieza anatómica, vísceras, fragmentos de tejido, órganos, coágulos sanguíneos, etc. debe tener un tamaño significativo y remitirse al Laboratorio. b.- En el caso de Exámenes Anatomopatológicos, todas las muestras como restos placentarios, embrión, feto, órganos completos, etc. Deben remitirse fijados en formol al 1% que resulta de mezclar una parte de formol puro vendido al 40% con nueve (09) partes de agua corriente. El volumen del líquido fijador debe ser mayor que el de la muestra cubriéndola con exceso. Si el órgano o víscera es de gran volumen puede cortársele con cuchillo para facilitar el proceso de fijación. c.- Cuando se solicita Examen Toxicológico debe remitirse por separado muestra de vísceras, estómago y contenido gástrico sin agregarle ninguna sustancia como preservador o fijador, ya que estas sustancias tienen poder de interferencia en los análisis toxicológicos. d.- El recipiente para cualquier muestra debe ser de vidrio o de plástico inerte de boca ancha y con tapa esmerilada o de rosca cerrado y sellado con cinta adhesiva o esparadrapo, lacrado y/o sellado. No utilizar recipientes metálicos. Las muestras de sangre donde se determinara el Dosaje Etílico y Sustancias Estupefacientes y/o drogas afines; se enviarán en frasco vial llenos con tapa a presión y rotulado con cinta adhesiva. 6

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

e.- En el oficio de remisión debe consignarse, nombre, edad, sexo de la persona o del cadáver; naturaleza y tamaño aproximado de la muestra y región del cuerpo humano, de donde procede la muestra. Señalar necesariamente en forma sumaria datos referenciales o antecedentes del hecho. Si se ha practicado necropsia es indispensable el Protocolo de Necropsia o en su defecto los diagnósticos macroscópicos y conclusiones finales. Si el paciente hubiera estado en algún Centro de Salud enviar la hoja clínica. f.- Para el embalaje, el recipiente debe colocarse en una caja de madera o cartón grueso rodeado de viruta, telas o papeles para evitar el movimiento y la consiguiente ruptura o derrame de la muestra. g.- Las muestras deberán ser transportados por Agencia o por un Efectivo Policial o el perito toxicólogo debidamente acreditado, por ningún motivo enviar con personal civil ya que se pondrá en duda la identidad de las muestras. 1. Condiciones para la toma de muestra - Líquido biológico (Análisis de Emergencia). - Alimentos. - Vísceras. 2. Condiciones para el envío de la muestra - Envase. - Sellado. - Etiquetado. - Conservadores. 3. Condiciones de recepción de la muestra - Envase. - Sello. - Protocolo. 4. Técnicas de cuarteo de la muestra - Médico-legal * 50 % devolver. * 50 % análisis. - 25 % Análisis cuantitativo. - 5 % Ensayos preliminares. - 5 % Tóxicos Volátiles y gaseosos. - 5 % Tóxicos. Orgánicos Fijos. - 5 % Tóxicos Metálicos y no Metálicos. - 5 % Dirimencia. - Análisis general * 50 % Análisis cuali-cuantitativo. * 50 % Contramuestra. MUESTRAS REQUERIDAS EN EL EXAMEN TOXICOLÓGICO a.- VICTIMA CON VIDA: Vómitos. Sangre (de 15 a 50 mL). Lavado estomacal (Todo lo posible). 7

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

Orina (de 200 a 300 mL, muestra en 24 horas). Grasa corporal (biopsia). Pelos (Todo lo posible). A PARTIR DE OTRAS SUSTANCIAS: Alimentos (Todo lo posible). Raíces (Todo lo posible). Tierras (Todo lo posible). Gaseosas (Todo). Vinos (Todo). Jarabes (Todo). b.- VICTIMA SIN VIDA:

1.5 Resultados Los alumnos deben traer en la siguiente práctica una muestra correctamente embalada de acuerdo a las caracteristicas de la muestra, del análisis solicitado y de las normas legales para un análisis toxicológico. 1.6 Cuestionario 1. Normas legales que rigen el análisis toxicológico. 2. Procedimiento en caso de la exhumación de un cadáver. 3. Responsabilidad legal del profesional Químico-Farmacéutico en el análisis toxicológico. 1.7 Fuentes de información 1- Loomis, T. “Fundamentos de Toxicologia”. Acribia. Espana. 1982 2- Gisbert, J. “Medicina Legal y Toxicología”. 5ta. Edición. Masson. España. 2001 3- Fabre R, Truhaut R Tatado de Toxicología. Paraninfo 1977 Madrid España. 4- Código de Procedimientos Penales 8

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

II. PRÁCTICA No. 3 y 4 ANALISIS PRELIMINAR, ANALISIS ORGANOLEPTICO Y PAPELES SENSIBLES 1.1 Marco teórico El Análisis Organoléptico sirve como ayuda en la orientación del análisis toxicológico de la misma manera que la técnica de los Papeles Sensibles. 1.2 Competencias Practicar y evaluar el ingreso de los tóxicos para conocer las diferentes características organolépticas de una muestra problema y su significancia. Dar a conocer las técnicas de los Papeles Sensibles y su interpretación, para ello: - Realizar los análisis preliminares y organolépticos. - Preparar, ejecutar e interpretar los resultados de los papeles sensibles - Aplicar las normas de bioseguridad al evaluar la separación de las muestras para el análisis toxicológico y la aplicación de las técnicas preliminares. 1.3 Materiales y equipos - Muestra problema de la práctica. - Tiras para determinar el pH. - Tiras reactivas c.1. Tira Picrosodada (Acido. Pícrico 1%, luego Na2CO3 10%). c.2. Tira de Acetato de Plomo (Acetato de Plomo 10%). c.3. Tira de Hematoxilina. (Hematoxilina 2%). c.4. Tira de Nitrato de Plata. (AgNO3 10%). - Acido Tartárico 10%. 1.4 Procedimiento 1.4.1. Se procede a realizar el reconocimiento de todas aquellas características reconocibles por los sentidos: a. Olor. b. Color. c. Sabor (cuando se pueda, por no ser recomendado en toxicología). d. Aspecto. e. Consistencia. f. pH. 1.4.2. Todos estos datos se anotarán en un protocolo de análisis. 1.4.3. Se colocará la muestra, finamente picada, en un frasco de boca ancha y poner las tiras reactivas humedecidas en el borde del frasco sin tocar la muestra ni entre ellas, añadir ácido tartárico sin que contamine las tiras reactivas y tapar inmediatamente en forma hermética. Esperar 15’. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica que tóxicos tenia la muestra, el informe es individual. 9

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.6 Cuestionario a. Aparte de los ejemplos organolépticos mencionados en clase, mencione otros hallados en la bibliografía. b. ¿Puede el análisis indicar otra patología además de una intoxicación?, ejemplos. c. Mecanismo de reacción de las pruebas de las tiras reactivas. 1.7 Fuentes de información. 1. Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2. Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3. Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4. Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5. Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España.. 1982. 6. Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7. Albert, L; “Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997.

10

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

III. PRÁCTICA No. 5 y 6 MARCHA ANALITICA DE AISLAMIENTO DE TOXICOS GASEOSOS Y VOLATILES, y MARCHA ANALITICA DE AISLAMIENTO DE TOXICOS METALICOS PRÁCTICA No. 5 MARCHA ANALITICA DE AISLAMIENTO DE TOXICOS GASEOSOS Y VOLATILES 1.1 Marco teórico Los Tóxicos gaseosos y volátiles son un grupo importante dentro de las sustancias que causan daño debido a sus particulares propiedades de allí que sea vital su extracción sin pérdidas. 1.2 Competencias - Extraer los tóxicos volátiles de una muestra con un mínimo de pérdida - Separar los tóxicos volátiles y gaseosos a través de la destilación simple y por arrastre de vapor, en medio ácido y en medio alcalino. - Adquirir las destrezas para el manejo de sustancias altamente corrosivas y gaseosas, empleando equipos y materiales de seguridad. Emplear el método conductivista de participación permanente 1.3 Materiales y equipos . Tubos de prueba de 13 x 100 mm. . Equipo de microdestilación. . Baño Maria. . Tira indicadora de pH. . NaOH 10 %. . HCl 10 %. . H2O destilada. . Acido Tartárico 10 %. . Pipetas de 1mL y 5 mL. 1.4 Procedimiento - Se procederá a hacer una destilación en pH ácido (por adición de Ácido Tartárico c.s. y se recibirá en un volumen. adecuado de NaOH 5 %. - Luego, la misma muestra ácida se llevará hasta pH alcalino con c.s. de Hidróxido de amonio 10% y se recibirá en un volumen adecuado de HCl 5 %. - Ambos destilados (ácido y alcalino) se guardarán para futuras prácticas. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica que tóxicos tenia la muestra, el informe es individual. 1.6 Cuestionario . Tóxicos que se pueden hallar en al destilado ácido y en el alcalino . Precauciones al realizar la micro destilación. 1.7 Fuentes de información 1. Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 2. Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 3. Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. 11

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

PRÁCTICA No. 6 MARCHA ANALITICA DE AISLAMIENTO DE TOXICOS METALICOS 1.1 Marco teórico Los tóxicos metálicos causan una serie de enfermedades a nivel laboral y ambiental de allí su importancia toxicológica y el valor de su determinación en una muestra problema. 1.2 Competencias - Aprender los diferentes métodos en el aislamiento de los tóxicos metálicos en muestras problemas Realizar el Ensayo de láminas Metálicas. Realizar la destrucción de la materia orgánica para aislar los tóxicos metálicos y no metálicos para llevarlos a su forma ionizada por el método de la vía húmeda. - Adquirir las destrezas para el manejo de sustancias altamente corrosivas y gaseosas, empleando equipos y materiales de seguridad. Emplear el método constructivista con participación permanente. 1.3 Materiales y equipos . Erlenmeyers de 200 mL. . Muestras problemas variadas. . Campana extractora. . Cocinilla eléctrica. . Pipetas de 1mL y 5 mL. . HNO3 Q.P. . H2SO4 Q.P. . HClO4 Q.P. 1.4 Procedimiento Se explicará los diferentes tipos de tratamiento de las muestras problemas para aislar los tóxicos metálicos en base a las características de estos - Destrucción de la Materia Orgánica (DMO) (Técnica. Kahane) Trabajar en campana extractora * Muestra problema 5-10 g * HNO3 Q.P. 10 mL * HClO4 Q.P. 0,5 mL * H2SO4 Q.P. 1 mL. * Calor hasta disolución total. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la practica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de destrucción de la materia orgánica. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Precauciones para la extracción de los tóxicos metálicos. . Función de cada reactivo en la técnica empleada. 1.7 Fuentes de información. 1. Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2. Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 5. Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6. Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 12

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

IV. PRÁCTICA No. 7 y 8 MARCHA ANALITICA DE AISLAMIENTO DE TOXICOS ORGANICOS FIJOS 1.1 Marco teórico Los Tóxicos Orgánicos Fijos son el grupo más numerosos dentro de la Toxicología, causan intoxicaciones tanto de tipo intencional, homicidio, como por abuso, de allí que sea importante su correcta extracción y aislamiento 1.2 Competencias - Extraer los tóxicos orgánicos fijos de una muestra con un mínimo de pérdida. - Extraer y separar los diferentes tóxicos orgánicos fijos de acuerdo a sus propiedades físico químicas, en tóxicos ácidos fuertes, ácidos débiles, neutros y básicos. - Evaluar los diferentes residuos obtenidos para su posterior identificación. - Valorar la importancia de la separación de los tóxicos orgánicos fijos al más alto grado de pureza por ser estos los que causan el mayor porcentaje de intoxicaciones y ser los más hábiles. Emplear el método conductivista de participación permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de prueba de 13 x 100 mm., con tapón. . Matraces de 100 mL. . Baño maría. . Peras de separación. . Centrífuga. . Tiras indicadoras de pH. . Tungstato de sodio 10%. . NaOH 10%. . H2O destilada. . NH4OH Q.P.. . HCl Q.P. . Eter dietílico o cloruro de metileno o cualquier solvente inmiscible con el agua. 1.4 Procedimiento - Se procederá a hacer una desproteinización según el método de Curry obteniéndose un filtrado limpio. (Las cantidades son proporcionales). * Muestra Problema (Vísceras) 100 G. * Na2WO4 10% 120 mL. * H2O d 180 mL. * NaOH 10% 20 mL. * H2SO4 2/3N 100 mL. Baño maría hirviente por 15’, filtrar. - Luego se hará una extracción con solventes orgánicos a pH ácido 3,5 (HCl Q.P.) Éter Etílico o con un solvente inmiscible, se guarda la fase orgánica. - Luego, el mismo filtrado, se llevará a pH alcalino con el NH4OH Q.P. (9.5) y se extraerá con otra alícuota de Éter Etílico u otro solvente orgánico, se guarda la fase orgánica. - La fase orgánica de la primera extracción (Acida) servir a para separar los tóxicos orgánicos ácidos fuertes, ácidos débiles y neutros. - Las fases orgánicas servirán para futuras prácticas. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la practica e indicar en el informe de la practica las ventajas y 13

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

desventajas de los diferentes métodos de extracción de los tóxicos orgánicos fijos. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Tóxicos que se pueden hallar en el residuo ácido . Tóxicos que se pueden hallar en el residuo alcalino . Precauciones en la desproteinización y separación en residuos 1.7 Fuentes de información. 1. Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2. Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3. Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4. Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5. Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6. Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7. Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8. Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

14

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

V. PRÁCTICA No. 9 y 10 DETERMINACION DE MONOXIDO DE CARBONO EN SANGRE Y ACIDO CIANHIDRICO Y DETERMINACON DE ALCOHOLES ALIFATICOS. DIFERENCIACION DE ETANOL Y METANOL PRACTICA No 9 DETERMINACION DE MONOXIDO DE CARBONO 1.1 Marco teórico El Monóxido de carbono es uno de los tóxicos gaseosos más comunes y abundante del medio ambiente razón por la que puede causar intoxicaciones de tipo agudo 1.2 Competencias - Extraer e identificar el tóxico gaseoso monóxido de carbono. - Adquirir destrezas para reconocer los grados de intoxicación y el tratamiento de urgencia a realizar. - Mostrar las diferentes técnicas de determinación de Monóxido de Carbono en sangre Emplear el método descriptivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Frasco de vidrio transparente con tapa hermética. . Equipo de toma de muestra de sangre venosa. . Un ratón pequeño. . 2 jeringas de tuberculina. . Una luna de vidrio de 20 x 20 cm. . Guantes desechables. . Tubos de 13 x 100 mm. . NaOH 10%. . Ac. Tánico 1 %. . Agua destilada. 1.4 Procedimiento Se procederá a producir la muerte del ratón por asfixia para obtener sangre con carboxihemoglobina, posteriormente se someterá ésta muestra a diversas pruebas (Rx. Alcalina, Rx. al Ac.Tánico) contra datos de un standard. - Producir la muerte del ratón por asfixia. (Dentro de un frasco con tapa hermética, donde se genera CO). - Toma de muestra de sangre por punción cardíaca. - Rx Alcalina. * A un vol. de sangre agregar 4 Vol. de agua y un Vol. de NaOH 10%, anotar el tiempo en que llega a color chocolate - Rx del Ac. Tánico. * A un vol. de sangre se le agregar 4 Vol. de agua destilada y luego 3 de Ac. Tánico 1%. - Comparar los resultados contra datos de standard. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar el probable nivel de intoxicación. El informe es individual. 15

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.6 Cuestionario . Fundamento de las reacciones de la práctica . Posibles interferencias de las reacciones de la práctica, procedimientos para detectarlas 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. PRACTICA No 9 DETERMINACION DE HCN Y DERIVADOS 1.1 Marco teórico El Ácido Cianhídrico actualmente no se emplea como tal, pero si sus derivados y además puede ser producido de manera natural por algunas plantas (Glicósidos Cianogenéticos). 1.2 Competencias - Extraer e identificar el tóxico gaseoso Acido Cianhídrico. - Adquirir destrezas para reconocer los grados de intoxicación y el tratamiento de urgencia a realizar. - Demostrar la presencia de HCN o sus derivados en diferentes muestras. - Mostrar las diferentes técnicas de determinación de Ácido Cianhídrico en sangre y vísceras. Emplear el método descriptivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1 y 5 mL. . Muestras (Pepas de manzana, guindones, agua de frijoles). . Baño maria. . NaCN 10% (como standard). . Acido Pícrico, solución saturada. . FeSO4 2% (de preparación reciente). . HCl Q.P. . NaOH 5%. 1.4 Procedimiento Se procederá a realizar un machacado con las muestras problemas y posteriormente se decantará, en el decantado se identificará la presencia de derivados del HCN mediante - Rx de Grignard: * Destilado (ligeramente alcalino) 5 mL. * Ac. Pícrico (sol. saturada) V gotas. * Calor hasta aparición de color rojizo. 16

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Rx del Sulfato ferroso: * Destilado * FeSO4 2% * FeCl3 5% * HCl Q.P.

5 mL. V gotas. V gotas. V gotas. Comparar resultados contra standard.

1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la practica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar el probable nivel de intoxicación. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas. . Posibles interferencias y procedimiento para detectarlas. 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. PRÁCTICA No. 10 DETERMINACON DE ALCOHOLES ALIFATICOS. DIFERENCIACION DE ETANOL Y METANOL 1.1 Marco teórico El Etanol es una de las causas más frecuentes de intoxicación intencional, de accidentes de tránsito y de abuso, asimismo es común la adulteración de bebidas alcohólicas con Metanol que es un alcohol mucho más tóxico. 1.2 Competencias - Determinar la alcoholemia e interpretar los resultados, evaluar los grados de ebriedad. Adquirir destrezas para reconocer los grados de intoxicación y tratamiento de urgencia a realizar. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Muestras problemas diversas de bebidas alcohólicas. . Equipo de microdestilación. . Baño de hielo. . Baño maría. . Espectrofotómetro visible. . Mezcla sulfocrómica (K2CrO7 al 2.5 % en H2SO4 al 50%). 17

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

. Ac. Cromotrópico Q.P. . H2SO4 Q.P. 1.4 Procedimiento Se procederá a destilar la muestra problema para obtener los alcoholes presentes, posteriormente se les identificará y diferenciará mediante las reacciones respectivas - Destilación de la muestra problema - Reacción de Nicloux * Destilado 5 mL. * Mezcla Sulfocrómica 5 mL. * Observar la coloración que aparece (se puede cuantificar leyendo a 450 nm). - Diferenciación mediante Rx con el Ac. Cromotrópico. * A los tubos anteriores agregar 10 mg de Ac. Cromotrópico y luego H2SO4 Q.P. en Zona. * Observar coloración. - Comparar con los resultados de los standares. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar el grado de alcoholemia y su implicancia legal. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de las pruebas de la práctica. . Posibles interferencias y procedimientos para detectarlas. 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

18

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

VI. PRÁCTICA No. 11 y 12 DETERMINACION DE INSECTICIDAS ORGANO FOSFORADOS, CARBAMICOS Y CLORADOS 1.1 Marco teórico Los Insecticidas y raticidas muchas veces son causantes de intoxicaciones en el hogar ya sea por descuido o intencionalmente y son las sustancias químicas que causan el mayor porcentajes de muertes. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Insecticidas en diferentes muestras problemas. - Extraer, purificar e identificar por cromatografía en capa fina los plaguicidas organofosforados, organocarbámicos y organoclorados. -Evaluar los diferentes métodos de extracción, purificación e identificación de los plaguicidas. - Adquirir destreza para extraer e identificar rápidamente los plaguicidas para darle el tratamiento respectivo por ser los tóxicos que causan la mayor incidencia de muertes. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Placas cromatográficas de 20 x 20 cm de Silicagel G. . Cámara de revelado cromatográfico. . Sistema de solventes Benceno:acetona 5:1 o Hexano:Acetona 4:1. . Cloruro de Paladio 1% (I.O.F.). . Azul de Bromofenol (I.O.F.). * Azul de Bromofenol 0,05 G. * Acetona 10 mL. * AgNO3 1% (en H2O:acetona, 3:1) csp 100 mL. . Difenilamina 0.2% (en etanol) (I.O.Cl.). . p-Dimetilaminobenzaldehido 1% (EtOH) (I.O.C.). . Ácido Acético 5%. 1.4 Procedimiento Se trabajará con el residuo neutro de la práctica de aislamiento de los T.O.F., pero también se puede trabajar con muestras problemas sin tratar mediante las técnicas de extracción rápida (M.P. más n-Hexano c.s.p cubrir, agitar por 30’ y separar). La determinación de los Insecticidas se realiza por C.C.F. y revelado diferencial con diferentes reveladores. - En una cromatoplaca de 20 x 20 cm estriada sembrar las muestras a una distancia superior a la del nivel del sistema de solventes. - Colocar la placa en la cámara de revelado y dejar correr aproximadamente el 70%. - Sacar la placa y dejar secar, aplicar a cada zona los diferentes reveladores y observar la coloración. - Cloruro de Paladio: Manchas amarillas o rojas. - Azul de Bromofenol: (previo rociado con Ácido Acético 5%) Manchas azules o marrones sobre fondo amarillo. - Difenilamina: Manchas verdes, castañas o violetas. - p-Dimetilaminobenzaldehido : Manchas amarillas. - Comparar los colores contra estándares. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y 19

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar el plaguicida encontrado y su implicancia legal. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Valores tóxicos de los insecticidas estudiados . Posibles interferencias y procedimientos para detectarlas 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

20

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

VII. PRÁCTICA No. 13 y 14 DETERMINACION DE PLOMO Y DETERMINACION DE MERCURIO. PRACTICA No. 13 DETERMINACION DE PLOMO 1.1 Marco teórico El Plomo es uno de los metales más usados por el hombre, de allí que su extracción sea continua, lo que origina problemas de contaminación ambiental, ocupacional y accidental. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Plomo en las muestras orgánicas previa DMO. - Extraer y cuantificar espectrofotométricamente el plomo de líquidos biológicos. - Interpretar toxicológicamente las concentraciones en líquidos biológicos, alimentos y medio ambiente. - Adquirir destreza para extraer y cuantificar el plomo teniendo en cuenta las medidas de bioseguridad. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Residuo de la DMO. . Pipetas de 1, 5 y 10 mL. . Peras de separación de 100 mL. . NH4 Citrato 40%. . NH4OH 20%. . KCN 10%. . Hidroxilamina 20%. . Ditizona extractora 16 mg% (CHCl3). . Buffer 3-4: * HNO3 Q.P. 4.05 mL. * H2O d 2.5 mL. * Azul de Bromofenol 0.05 %. * NH4OH Q.P. csp pH 3-4. * Solución A: - Tartrato ácido de Potasio 1.021 g - HCl 0.2 N 5 mL. - H2O csp 50 mL. * H2O csp 500 mL. . Ditizona standard 8 mg% (CHCl3): . Solución Amonio Cianurada: * KCN 10% 20 mL. * NH4OH Q.P. 15 mL. * H2O csp 100 mL. 1.4 Procedimiento La Determinación de Plomo se lleva a cabo por la Técnica Espectrofotométrica de Bambach y Burkey, y comprende 3 etapas. a. Extracción incial: - M.P. (de DMO) - NH4 Citrato 40%

20-30 mL. 15 mL. 21

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Rojo de Fenol - NH4OH 20% csp - KCN 10% - Hidroxilamina 20% - Ditizona extractora 16 mg % - Agitar y separar la Ditizona. b. Purificación: - Ditizona. - Sol Buffer 3-4 - Agitar y separar la fase acuosa.

Tres gotas pH 7-8. 5 mL. 1 mL. 5 mL.

50 mL.

c. Extracción final: - Fase acuosa. - Ditizona standard 8 mg% 15 mL. - Sol. Amonio Cianurada 7 mL. - Agitar y separar la fase orgánica. Leer a 520 nm contra blanco de CHCl3. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la practica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar que significa la concentración encontrada y su implicancia legal. El informe es individual 1.6 Cuestionario . Explique la función de cada reactivo en la técnica . Valores normales y tóxicos de Plomo 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998.

PRÁCTICA No. 14 DETERMINACION DE MERCURIO 1.1 Marco teórico El Mercurio, en base a su característica de volatilidad, puede evaporarse a temperatura ambiente lo que ha ocasionado casos de intoxicación aguda (Caso Cajamarca). 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Mercurio en el residuo de la DMO en frio. - Extraer y cuantificar espectrofotométricamente el mercurio de líquidos biológicos. - Interpretar toxicológicamente sus concentraciones en líquidos biológicos, alimentos y medio ambiente. - Adquirir destreza para extraer y cuantificar mercurio teniendo en cuenta las medidas de bioseguridad. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 22

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.3 Materiales y equipos . Residuo de la DMO en frio. . Azul de Timol. . HNO3 Q.P. . Hidroxilamina 20%. . Ditizona extractora 16 mg% (en CHCl3). . HCl 0.25N. . KBr 40%. . Buffer 6. . Ditizona standard 8 mg% (en CHCl3). 1.4 Procedimiento La determinación de Mercurio se lleva a cabo mediante la Técnica Rspectrofotometrica de Jacobs y Golman y comprende 3 fases. a. Extracción inicial: - M.P. 20 mL. - Azul de Timol II Gtas. - HNO3 q.p. csp pH 1.5. - Hidroxilamina 20% 2 mL. - Ditizona extractora 16mg% 5 mL. - Agitar y separar la fase orgánica. b. Purificación: - Fase Orgánica. - HCl 0.25N 50 mL. - KBr 40% 5 mL. - Agitar y separar la fase acuosa. c. Extracción final: - Fase acuosa. - Buffer 6 10 mL. - Ditizona standard 8 mg% 15 mL. - Agitar y separar la fase orgánica y leer a 490 nm. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la practica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar que significa la concentración encontrada y su implicancia legal. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Fundamento de la reacción. . Función de cada reactivo de la técnica. . Valores normales y tóxicos del Hg. 1.7 1 2 3 4

Fuentes de información. Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 23

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

VIII. PRÁCTICA No. 15 y 16 PRIMERA EVALUACION PRÁCTICA

IX. PRÁCTICA No. 17 y 18 DETERMINACION DE ARSENICO Y DETERMINACION DE CROMO Y TALIO PRÁCTICA No. 17 DETERMINACION DE ARSENICO 1.1 Marco teórico El Arsénico comúnmente se encuentra asociado con otros metales por lo cual al purificar estos metales se liberan cantidades de As contaminando el medio ambiente. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Arsénico en una muestra. - Determinar espectrofotométricamente el Arsénico. - Interpretar toxicológicamente la concentración en líquidos biológicos, alimentos y medio ambiente. - Adquirir destrezas para realizar los análisis químico-toxicológicos y respetar las normas de bioseguridad y ética. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Equipo de Microdestilación. . M.P. . HCl Q.P. . KI 15%. . SnCl4 40%. . CuSO4 2%. . Zn metálico. . Dietilditiocarbamato de plata 0.5% (en Piridina). . Equipo de Vasac y Sedivec. 1.4 Procedimiento - Colocar la M.P. en el equipo de Vasac y Sedivec. - HCl Q.P. 5 mL. - KI 15% 2 mL. - SnCl4 40% VIII Gtas. - Reposo por 15’. - CuSO4 2% 1 mL. - Zn metálico 3 granallas. - Reposo por 30’. - Recibir en Dietilditiocarbamato de plata 0.5% 3 mL. - Leer 540 nm. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar que significa la concentración encontrada y su implicancia legal. El informe es individual. 24

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.6 Cuestionario . Fundamento de la reacción. . Función de cada reactivo. . Valores normales y tóxicos de As. 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. PRÁCTICA No. 18 DETERMINACION DE CROMO 1.1 Marco teórico El Cromo es un metal que produce irritación a nivel dérmico en personas expuestas, también se le ha asociado con Cáncer dérmico. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Cromo en una muestra problema. - Determinar el Cromo e Interpretar toxicológicamente su concentración en líquidos biológicos, alimentos y medio ambiente. - Adquirir destrezas para realizar los análisis quimico-toxicológicos y respetar las normas de bioseguridad y ética. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Residuo de la DMO. . Baño maría. . AgNO3 1%. . K2S2O8. . HCl 0.1%. . H3PO4 Q.P. . H2SO4 Q.P. . Difenilcarbazida 1% (en EtOH). 1.4 Procedimiento El Cr se reconoce por la Técnica de Cazeneuve. - M.P. 5 mL - AgNO3 1% I Gta. - K2S2O8 0.01 g - Baño maría hirviente por 15’. - HCl 0.1% V Gtas. 25

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Baño maría hirviendo por 15’. - Enfriar - H3PO4 Q.P. II Gtas. - H2SO4 Q.P. II Gtas. - Difenilcarbazida 1% (EtOH) V Gtas. - Observar la coloración. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e indicar la presencia o ausencia del Cromo en la muestra problema. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Fundamento de la reacción. . Función de cada reactivo de la técnica. . Valores normales y tóxicos del Cr. 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 7 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. PRÁCTICA No. 18 DETERMINACION DE TALIO 1.1 Marco teórico El Talio es un metal que se utiliza como raticida y que ocasiona intoxicaciones accidentales. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de Talio en una muestra problema. - Determinar el Talio e Interpretar toxicológicamente su concentración en líquidos biológicos. - Adquirir destrezas para realizar los análisis químico-toxicológicos y respetar las normas de bioseguridad y ética. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Residuo de la DMO. . Baño Maria. . HCl P,A. . Agua de bromo. . Ácido sulfosalicilico 10 %. . Cristal violeta 0.2 %. . Benceno P.A. 26

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.4 Procedimiento El Tl se reconoce por la Técnica Espectrofotométrica de Pompei. - M.P. 1 mL. - HCl P.A 0.1 mL. - Agua de bromo 0.2 mL. - Reposo por 2’. - Acido sulfosalicílico 10% 0.2 mL. - Cristal violeta 0.2 % 0.2 mL. - Benceno p.a. 5 mL. - Agitar y leer a 590 nm. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar la concentración encontrada. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Fundamento de la reacción. . Función de cada reactivo de la técnica. . Valores normales y tóxicos del Tl. 1.7 Fuentes de información. 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

27

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

X. PRÁCTICA No. 19 y 20 DETERMINACION DE HIDROCARBUROS, CLOROFORMO Y SOLVENTES ORGANICOS VOLATILES Y DETERMINACION DE AINEs PRACTICA No. 19 DETERMINACION DE HIDROCARBUROS, CLOROFORMO Y SOLVENTES ORGANICOS VOLATILES 1.1 Marco teórico Los Hidrocarburos y los Solventes Orgánicos Volátiles son usados ampliamente en la industria como disolventes de diferentes sustancias como lacas, pinturas, pegamentos, etc. de allí que sean causantes de intoxicaciones ocupacionales o, peor aún, intencionales. 1.2 Competencias - Determinar la presencia de S.O.V. en diferentes muestras problemas. - Extraer, purificar e identificar el benceno y cloroformo. Evaluar su presencia en líquidos biológicos. - Valorar su importancia como agente tóxico causal de intoxicaciones, y proponer medidas de prevención y tratamiento. Emplear el método constructivo permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de prueba de 13 x 100 mm. . Muestras problemas (pegamentos de o). . Equipo de microdestilación. . Baño maría. . Piridina Q.P. . NaOH 20%. . Rvo de Dragendorff. 1.4 Procedimiento Se realizará una destilación de las muestras problemas para obtener los solventes orgánicos contenidos en las mismas (Tener bastante cuidado porque la mayoría son inflamables) y posteriormente se les reconocerá por: - Rx de Fujiwara (trabajar en campana extractora). * Muestra problema 5 mL. * NaOH 20% 1mL. * Piridina Q.P. 1mL. * Baño maría hirviente/2’. * Observar coloración. - Rx de p-Nitrofenol (por I.O.F.) * Muestra problema * NaOH 10% * Baño maría hirviente/2’. * Observar coloración.

5 mL. 5 mL.

- Determinación de Alcaloides volátiles * Muestra problema 5 mL. * Rvo de Dragendorff 2 mL. * Observar formación de precipitado. 28

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Comparar los datos contra standard. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de las pruebas de la práctica. . Posibles interferencias y manera de detectarlas. 1.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997. PRÁCTICA No. 20 DETERMINACION DE AINEs 1.1 Marco teórico Los AINEs son fármacos que muchas veces, por no decir siempre, se comercializan sin receta médica, por lo cual pueden originar intoxicaciones por automedicación y sobredosis. 1.2 Competencias - Determinar los diferentes tipos de AINEs en la muestra procesada en la práctica de Aislamiento de T.O.F. - Extraer e identificar los derivados de las pirazolonas y el paracetamol por cromatografía en capa fina. Extraer, purificar, identificar y cuantificar los salicilatos e interpretar toxicológicamente su concentración en líquidos biológicos. - Valorar su importancia como agente tóxico causal de intoxicaciones, y propone medidas de prevención y tratamiento. Emplear el método descriptivo de asesoria permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1 y 5 mL. . Diferentes estándares de AINEs (Salicilatos, Paracetamol, Pirazolonas). . Extractos de la práctica de aislamiento de T.O.F. . FeCl3 5%. . Rvo de Trinder: * HgCl2 40 g. * HCl 1N 120 mL. 29

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

* Fe(NO3)3 40 g. * H2O csp 1000 mL. . AgNO3 10%. . HCl 5N. . NaNO2 Q.P. . HCl Q.P. . o-Cresol 1%. . NH4OH 4M. . Etanol Q.P. . Silicagel para la CCF. 1.4 Procedimiento Se trabajará en el residuo ácido de la práctica de extracción de T.O.F., el residuo se reconstituye con Etanol y se realizarán las siguientes determinaciones: - Determinación de Salicilatos * M.P. 5 mL. * FeCl3 5% 2 mL. * Observar la coloración. - Cuantificación de Salicilatos. * M.P. 1 mL. * Rvo Trinder 5 mL. * Agitar por 5’ y leer a 540 nm contra Standard de 5 mg %. - Determinación de Pirazolonas: * M.P. 1 mL. * AgNO3 10% 0.5 mL. * HCl 5N 1 mL. * NaNO2 Q.P. 1 mg. * Observar el color. - Determinación de Paracetamol: * M.P. 1 mL. * o-Cresol 1% 1 mL. * NH4OH 4M 2 mL. * Observar la coloración. - Comparar los resultados contra los estándares. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones y la concentración de salicilato encontrado. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Toxicidad de las sustancias analizadas. . Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas. . Concentraciones tóxicas de las sustancias determinadas. . Posibles interferencias y procedimientos para detectarlas 30

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

31

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

XI. PRÁCTICA No. 21 y 22 DETERMINACION DE DEPRESORES DEL SNC: BARBITURICOS, BENZODIAZEPINAS Y FENOTIAZINICOS 1.1 Marco teórico Los Depresores del SNC pueden causar depresión de tipo selectivo o no selectivo y además sinergisarse con otros depresores lo que aumenta su toxicidad. 1.2 Competencias - Reconocer los diferentes depresores centrales más frecuentes en casos de intoxicación. - Evaluar las intoxicaciones producidas por los derivados barbitúricos. Su dependencia y su implicancia social. - Evaluar las intoxicaciones producidas por los derivados benzodiazepínicos. Su dependencia y su implicancia social. - Toxicidad de los derivados fenotiazínicos. Tratamiento en casos de intoxicaciones. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1 y 5 mL. . Diferentes estándares (Barbitúricos, benzodiacepinas, fenotiazinas). . Baño maria de glicerina. . HCl Q.P. . NaNO2 0.1%. . Sulfamato de Amonio 0.5%. . N-Naftiletilendiamino.HCl 0.1%. . Co(NO3)2 5% (en Etanol). . Isopropilamina 5% (en Etanol). . CuSO4 0.5%. . Piridina 5% (en cloroformo). . Rvo FPN: * FeCl3 5% 5 mL. * HClO4 20% 45 mL. * HNO3 50% 50 mL. 1.4 Procedimiento Se usarán los extractos obtenidos en el aislamiento de los tóxicos orgánicos fijos ( T.O.F.) y se procederá a realizar las diferentes reacciones de reconocimiento o identificación, como se indica a continuación. a) Rx de reconocimiento de Barbitúricos: - Rx de Parry-Coppangy: * M.P. * Co(NO3)2 5% en EtOH * Isopropilamin 5% en EtOH * Observar la coloración. - Rx de Zwiker: * M.P. * CuSO4 0.5%

5 mL. III Gts. IV Gts.

5 mL. 0.5 mL. 32

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

* Agitar fuertemente * Piridina 5% (CHCl3) 0.5 mL. * Observar coloración de la fase orgánica. b) Rx de reconocimiento de Benzodiacepinas: - Rx de Bretton-Marshall : * M.P. 1 mL. * HCl 6N. 5 mL. * Baño maría de Glicerina a 125 *C/ 45’. * NaNO2 0.1% 0.25 mL. * Agitar y reposo por 3’. * NH4 Sulfamato 0.5% 0.25 mL. * Agitar y reposo por 3’. * N-Naftiletilendiamino.HCl 0.1% 0.25 mL. * Observar la coloración (Se puede cuantificar leyendo a 550 nm). c) Rx de reconocimiento de Fenotiazinas. - Rx de Forrest: * M.P. * Rvo FPN * Observar la coloración.

5 mL. V gotas.

- Comparar los resultados contra los estándares. 1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones encontradas. El informe es individual. 1.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de cada prueba. . Posibles interferencias y manera de detectarlas. 1.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

33

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

XII. PRÁCTICA No. 23 y 24 EXPOSICION DE SEMINARIOS DE TOXICOLOGIA AMBIENTAL, ECOTOXICOLOGIA, OCUPACIONAL, INDUSTRIAL, ALIMENTARIA, MEDICAMENTOSA, SOCIAL, FORENSE, COSMETICA Y DE URGENCIA POR TODOS LOS ALUMNOS XIII. PRÁCTICA No. 25 y 26 DETERMINACION DE SUSTANCIAS CAUSTICAS Y CORROSIVAS Y DETERMINACION DE MARIHUANA PRACTICA No. 25 DETERMINACION DE SUSTANCIAS CAUSTICAS Y CORROSIVAS 14.1 Marco teórico Las Sustancias Cáusticas y Corrosivas causan fuertes irritaciones a nivel de la piel mucosas causando intoxicaciones agudas muchas veces con descenlace fatal.

y

14.2 Competencias - Determinar la presencia de Corrosivos y Cáusticos. - Extraer e identificar de las sustancias cáusticas y corrosivas. - Adquirir destrezas para identificar las diferentes sustancias causticas y corrosivas teniendo en cuenta las normas de bioseguridad y ética. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 14.3 Materiales y equipos . Muestras problemas. . H2O destilada. . BaCl2 2 %. . AgNO3 1%. . Acetato de Cobre 3 %. . Brucina q.p. . Hematoxilina q.p. . Ácido clorhídrico. . Ácido sulfúrico. . Ácido nítrico. . Amoniaco, 14.4 Procedimiento - Macerar la muestra problema en H2O por 30’ aproximadamente. - Realizar las determinaciones de los diferentes corrosivos y cáusticos. - Determinación de H2SO4: * M.P. 5 mL. * BaCl2 2% 2 mL. * Observar la formación de precipitado. - Determinación de HCl: * M.P. 5 mL. * AgNO3 1% 1 mL. * Observar la formación de precipitado. 34

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

- Determinación HNO3: * M.P. * Brucina * Observar coloración

5 mL. 5 mg.

- Determinación de NH4OH: * M.P. 5 mL. * Hematoxilina 5 mg. * Observar coloración - Comparar los resultados contra los estándares. 14.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones encontradas. El informe es individual. 14.6 Cuestionario . Fundamento de la determinación de cada corrosivo y cáustico. . Diferencias entre una corrosión por ácidos y álcalis. 14.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. PRÁCTICA No. 26 DETERMINACION DE MARIHUANA 14.1 Marco teórico La Marihuana es una de las drogas de abuso más comun en nuestro medio, consumida por amplios grupos de la sociedad, además es causa de un gran mercado negro 14.2 Competencias - Determinar la presencia de Marihuana en diferentes muestras. - Identificar la marihuana por los métodos macroscópico y microscópico. - Extraer, purificar e identificar por cromatografía en capa fina y colorimétricamente los cannabinoides en líquidos biológicos y en la planta de marihuana. - Adquirir destrezas para identificar los principios activos de la marihuana en líquidos biológicos y la planta teniendo en cuenta las normas de bioseguridad y ética. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 14.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1 y 5 mL. . Microscopio. . Cocinillas. 35

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

. Mecheros. . Tubos de centrifuga. . Gradillas. . Pipetas de 1, 2, 5, 10 mL. . Placas de vidrio de 10 ´por 10 cm. . Rociador. . Cuba de CCF . Capilares. . Muestras sospechosas de Marihuana. . Ácido clorhídrico al 20 % . Cloroformo. . Etanol. . Silicagel para CCF. . Rvo de Duquenois: * Vainillina 0.4 G. * Acetaldehido IV Gts. * Etanol (96°) 20 mL. . Benceno q.p. . Bencidina Diazotada: *A. Bencidina 0.5 G. HCl Q.P. 1.5 mL. H2O csp 100 mL. *B. NaNO2 10%. 14.4 Procedimiento . Determinación de Marihuana. - Rx de Duquenois. * M.P. más Rvo de Duquenois csp cubrir, hacer un machacado y luego decantar, trabajar con el líquido decantado. * HCl q.p. 2 mL (en zona). * Observar. * CHCl3 2 mL. * Agitar (La Marihuana debe pasar a la fase clorofórmica). - C.C.F. * Sembrar la muestra en la cromatoplaca y correr en Benceno. * Revelar con Bencidina Diazotada (mezclar A. y B. y rociar). * Observar la coloración y Rf. - Cannabidiol Amarillo naranja 0.12. - Delta9-THC Rojo naranja 0.71. - Cannabinol Rojo castaño 0.38. 14.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la practica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones encontradas. El informe es individual. 14.6 Cuestionario 1. Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas en la práctica. 36

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

2. Posibles interferencias y procedimientos para detectarlas. 3. Otras técnicas de determinación. 14.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Pineda, E; “Toxicología Alimentaria, Plaguicidas”. Iram, Buenos Aires, Argentina. 1980. 5 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 6 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. 8 Martínez, A; Romieu, Isabelle; “Introducción al Monitoreo Atmosférico”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / Gobierno del Estado de México. Secretaría de Ecología, Metepec, México D.E.1997.

37

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

XIV. PRÁCTICA No. 27 y 28 DETERMINACION DE ALCALOIDES: ESTRICNINA, BRUCINA, ATROPINA, CODEINA Y MORFINA Y DETERMINACION DE COCAINA EN LIQUIDOS BIOLOGICOS Y EN MUESTRAS SOLIDAS PRÁCTICA No. 27 DETERMINACION DE ALCALOIDES: ESTRICNINA, BRUCINA, ATROPINA, CODEINA Y MORFINA. 1.1 Marco teórico Los alcaloides son sustancias que se encuentran en las plantas principalmente y algunos animales. Muchos de éstos son usados como fármacos y otros como venenos según la dosis ingerida. En la presente práctica vamos a identificar los más tóxicos y los que producen dependencia. 1.2 Competencias - Reconocer los diferentes alcaloides que generan intoxicaciones y dependencia más frecuentes. - Evaluar las intoxicaciones producidas por la estricnina, brucina y atropina. - Evaluar la dependencia que producen la morfina y codeína. Tratamiento en casos de intoxicaciones. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL. . Diferentes estándares al 1% de: Estricnina, Brucina, Atropina, Codeína y Morfina. . Placas de toque. . Capsulas. . Tubos de centrifuga. . Gradillas. . Vaguetas. . Placas de vidrio 10 por 10 cm para C.C.F. . Rociador. . Cuba para C.C.F. . Cocinillas. . Mecheros. . Capilares. . Metanol. . Acetona. . Trietanolamina. . Reactivo de Dragendorff. . Reactivo de Bouchardat. . Reactivo de Valser y Mayer. . Ácido nítrico concentrado. . Cloruro estannoso AL 10% . Ácido sulfúrico. . Cristales de bicromato de potasio. . Vanadato de amonio al 1% en ácido sulfúrico. . Ácido nítrico fumante. . Hidróxido de potasio al 10% en alcohol. . p-Dimetilaminobenzaldehido al 1% en ácido sulfúrico. . Molibdato de amonio al 1% en ácido sulfúrico. 38

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

. Formol al 1% en ácido sulfúrico. . Vainillina al 0.3% en ácido clorhídrico - Silicagel G para cromatografía en capa fina. 1.4 Procedimiento Se usarán los extractos obtenidos en el aislamiento de los T.O.F. y se procederá a realizar las diferentes reacciones de reconocimiento. . Rx de reconocimiento de Brucina: - Rx con el ácido nítrico de coloración roja intensa, más una gota de cloruro estannoso el color vira al violeta. . Rx. de reconocimiento de la Estricnina: . Disolver el residuo en un mL de ácido sulfúrico y colocarle un cristal de bicromato de potasio, deslizar el cristal y aparecerá una línea azul a violeta. . Tratar el residuo con gotas de vanadato de amonio en ácido sulfúrico, aparecerá una coloración violeta intensa. . Rx. de reconocimiento de Atropina: . Tratar el residuo con 0.5 mL de ácido nítrico, mas calentar suavemente hasta evaporar. Enfriar y añadir una gota de potasa alcohólica, aparece una coloración violeta. . Tratar el residuo con gotas de PDAB, aparece una coloración roja violácea. . Rx. de reconocimiento de la Morfina: . Tratar el residuo con gotas de molibdato de amonio en sulfúrico aparece una coloración violeta. . Tratar el residuo con formol en sulfúrico, aparece una coloración violeta que pasa al azul. . Rx. de reconocimiento de la Codeína: . Tratar el residuo con gotas de molibdato de amonio en sulfúrico, no aparece ninguna reacción. . Tratar el residuo con formol en sulfúrico, aparece una coloración violeta que pasa al azul. -

Determinación de alcaloides por cromatografía en capa fina.

1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones encontradas. El informe es individual. 14.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de cada prueba. . Posibles interferencias y manera de detectarlas. 14.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Klaassen, C “Casarett and Doull’s. Toxicology: The basic Science of poisons”. 6 Ed. Nueva York. Pergamon Press. New York. 2001. 39

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

PRÁCTICA No. 28 DETERMINACION DE COCAINA 14.1 Marco teórico La Cocaína es una de las drogas de abuso más común en nuestro medio, consumida por un amplio grupo de la sociedad, además son causa de un gran mercado negro. 14.2 Competencias - Determinar la presencia de Cocaína en diferentes muestras. - Identificar la Cocaína por métodos colorimétricos, cristalográficos y por cromatografía en capa fina en muestras de tráfico ilícito de drogas y líquidos biológicos. - Adquirir destrezas para identificar la cocaína, fibras y pelos para transformar los indicios en pruebas de delito. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 14.3 Materiales y equipos . Tubos de 13 x 100 mm. . Pipetas de 1, 2, 10 y 5 mL. . Baguetas. . Rociador. . Capilares. . Porta objetos. . Cubre objetos. . Microscopios. . Mecheros. . Cocinillas eléctricas. . Placas de vidrio 10 por 10 cm. . Cubeta de C.C.F. . Beaker de 50 mL . Capsulas de porcelana. . Placas de toque. . Muestras sospechosas de Cocaína. . Silicagel para C.C.F. . Sistema de solventes MeOH:Acetona:trietanolamina, 100:100:0.3. . Rvo Dregendorff. . SnCl2 40%. . NaNO2 0.1%. . H2SO4 Q.P. . Tiocianato de Cobalto. . Acido pícrico saturado. . Permanganato de potasio al 1% . Tricloruro de fierro al 5% . Reactivo de lugol. . Ácido bórico. . Etanol. . Metanol. . Ácido sulfúrico. . Ácido clorhídrico al 10 % . Cloruro de bario al 10 % . Reactivo de Aldrich 40

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

14.4 Procedimiento a) Determinación de Cocaina. - Reacciones Generales de alcaloides - Reacción con el Tiocianato de Cobalto - Rx del Tiocianato de cobalto, da coloración azul. . Formación de los cristales de picrato de cocaína. . Formación de los cristales de permanganato de cocaína. b) Determinación de harina. c) Determinación de boratos. d) Determinación de carbonatos. e) Determinación de salicilatos. f) Determinación de anestésicos sintéticos. g) C.C.F. * Cromatoplacas de 20 x 20 de Silicagel G. * Sistema de solventes MeOH:Acetona:Trietanolamina, 100:100:0.3. * Revelador : Rvo Dragendorff. * Observar coloración y Rf. 14.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación e interpretar las reacciones encontradas. El informe es individual. 14.6 Cuestionario . Mecanismos de reacción de las pruebas efectuadas en la práctica. . Posibles interferencias y procedimientos para detectarlas. . Otras técnicas de determinación. 14.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Klaassen, C “Casarett and Doull’s. Toxicology: The basic Science of poisons”. 6 Ed. Nueva York. Pergamon Press. New York. 2001.

41

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

XV. PRÁCTICA No. 29 y 30 DIFERENCIACION DE MANCHAS DE SANGRE Y ESPERMA y DETERMINACION DE CABELLOS, PELOS PRÁCTICA No. 29 DIFERENCIACION DE MANCHAS DE SANGRE Y ESPERMA 14.1 Marco teórico Es importante la diferenciación de los rastros encontrados en diferentes escenarios de un crimen, como son las manchas de sangre y de esperma que tienen gran implicancia legal. 14.2 Competencias - Identificar las manchas de sangre, esperma y calostro en diferentes soportes por métodos colorimétricos, cristalográficos y por cromatografía en capa fina. - Adquirir destrezas para identificar las manchas de sangre, semen y calostro para transformar los indicios en pruebas del delito. Emplear el método constructivo de asesoría permanente. 14.3 Materiales y equipos MANCHAS DE SANGRE . Muestras problemas de manchas de sangre y esperma. . Microscopio con micrómetro. . Reactivo de Adler. . Reactivo de Kastle Scheede Meyer. . Reactivo de Teichmann. . Reactivo de Bertrand. . Reactivo de INPE. . Reactivo de Takayama. . Reactivo de Nina Adsvadurova. . Metanol – Acido acético (99-1). MANCHAS DE ESPERMA . H2SO4 P.A. . Lámpara de UV. . Reactivo de Florence. . Reactivo de Barberio. . Reactivo de de May Grunwald Giemsa. . HCl 0,1 M. . Ninhidrina 0,2 % en etanol. 14.4 Procedimiento . Diferenciación de las manchas de sangre y de esperma con los diferentes reactivos. Se hará un montaje en los portaobjetos para observación microscópica de los diferentes cristales que se obtienen de los extractos de las muestras de sangre y esperma. Se realizará la diferenciación por cromatografía en capa fina de las muestras de sangre y esperma. 14.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación y diferenciación. Interpretar las reacciones y los resultados, y su implicancia legal. El informe es individual. 42

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

14.6 Cuestionario . Características de la sangre y semen. . Implicancias legales. 14.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Klaassen, C “Casarett and Doull’s. Toxicology: The basic Science of poisons”. 6 Ed. Nueva York. Pergamon Press. New York. 2001. 7 Albert, L; “ Introducción a la Toxicología Ambiental”; Centro Panamericano de Ecología Humana y Salud – OMS / México. Secretaría de Ecología Metepec, México D.E. 1997. PRÁCTICA No. 30 DETERMINACION DE CABELLOS, PELOS Y FIBRAS 1.1 Marco teórico Es importante la diferenciación de los rastros encontrados en diferentes escenarios de un crimen que pueden pasar de indicios a pruebas del delito, 1.2 Competencias - Diferenciar los cabellos, pelos y fibras. - Diferenciar las fibras animales y vegetales. Identificar y diferenciar los pelos. - Adquirir destrezas para identificar las fibras y pelos para transformar los indicios en pruebas de delito. Emplear el método constructivista de asesoría permanente. 1.3 Materiales y equipos . Muestra problema de cabellos, pelos y fibras. . Microscopios con micrómetro. . Porta y cubreobjetos. . Sodio metálico p.a. . Nitroprusiato de sodio P.A. . p-Dimetilaminobenzaldehido 5% en solución clorhidrica. . Carbonato de sodio 10 %. . Etanol P.A. . Ácido sulfúrico P.A. . Cloroformo. . Esmalte de uñas transparente. . Tubos de centrifuga. . Gradillas. . Pipetas de 1, 2, 5, 10 mL 1.4 Procedimiento . Diferenciación de fibra vegetal y animal con el nitroprusiato de sodio. Se hará un montaje en los portaobjetos para observación microscópica. Se deberá comparar los índices medulares para diferenciación. . Diferenciación de las diferentes clases de cutícula. . Diferenciación de los diferentes canales medulares. 43

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez

1.5 Resultados Interpretar los resultados de la práctica e indicar en el informe de la práctica las ventajas y desventajas de los diferentes métodos de identificación y diferenciación. Interpretar las reacciones y los resultados, y su implicancia legal. El informe es individua. 1.6 Cuestionario . Características de los cabellos, fibras y pelos. . Implicancias legales. 1.7 Fuentes de información 1 Calabrese, A y Astolfi E; “Toxicología”. Kapeluz, Buenos Aires. Argentina. 1969. 2 Dreisbach, R; “Toxicología Clínica”. Manual Moderno. México D.E.1989. 3 Loomis, T; “Fundamentos de Toxicología”. Acribia, Zaragoza. España. 1982. 4 Simonin C; “Medicina Legal Judicial”. Juhs, Barcelona, España. 1982. 5 Gisbert Calabuig, J; “Medicina Legal y Toxicología”; 5ta Edición. Masson. Barcelona. 1998. 6 Klaassen, C “Casarett and Doull’s. Toxicology: The basic Science of poisons”. 6 Ed. Nueva York. Pergamon Press. New York. 2001.

XVI. PRÁCTICA No. 31 Y 32 SEGUNDA EVALUACION PRÁCTICA.

44

Mg. Jesús Lizano Gutiérrez