Conteo De Esporas 1n3u2z

1. INTRODUCCIÓN Los hongos forman un grupo de organismos talófitos, eucariotas, heterótrofos, desprovistos de clorofila, y que históricamente han sido estudiados en Botánica en la rama de la Micología. Actualmente se define como un grupo heterogéneo, polifilético, donde se reconocen tres líneas evolutivas independientes, reino Fungi, reino Stramenopila y Protistas. Con los vegetales comparten la presencia de paredes celulares definidas, en las fases vegetativas y reproductivas o solo en la fase de reproducción, la presencia de esporas y la forma de crecimiento pluricelular, filamentosa o alargada. Los hongos se originan a partir de esporas, que son células especializadas que tienen la misma función que las semillas en las plantas. Cuando las esporas encuentran las condiciones adecuadas de humedad, temperatura, luz y nutrientes, entre otras, germinan y producen hifas, que son unas estructuras filamentosas que constituyen la unidad estructural fundamental de la mayoría de los hongos. Las hifas se ramifican y forman una masa algodonosa llamada micelio, que se extiende sobre el medio o superficie (como tierra o madera, entre otros) y produce los cuerpos fructíferos. Los hongos se dispersan mediante la producción de esporas. Las esporas fúngicas son células o conjunto de células, a menudo con una pared gruesa que les permite sobrevivir en condiciones difíciles. Con excepci6n de un grupo, las esporas fúngicas no son móviles, es decir, son incapaces de desplazarse de un sitio a otro. Pueden formarse por mitosis (esporas asexuales) o por meiosis (esporas sexuales). En gran medida, los científicos han clasificado tradicionalmente los hongos basándose en sus estructuras distintivas, en las cuales producen sus esporas sexuales. Los hongos se dispersan mediante la producción de esporas. Cuando se trata de evaluar la resistencia de las plantas a enfermedades o efectuar estudios específicos (epidemiológicos) del patógeno, muchas veces es necesario recurrir a la inoculación artificial, ya sea en invernadero o en campo. Para esto se utiliza inóculo a una concentración específica (es decir, un número determinado de esporas por mililitro), según el patógeno y hospedero en estudio, con la finalidad de obtener una buena infección que permita observar las diferencias entre los materiales evaluados. Para determinar la concentración se usa una cámara de Neubauer, con el cual se hacen conteos de esporas en campos de dimensiones conocidas, que darán el número de esporas por ml de la suspensión inicial. De esta forma, por medio de diluciones se obtiene el inóculo en la concentración deseada.

2. OBJETIVOS 

Realizar un conteo de esporas en la cámara de Neubauer.



Determinar el número de esporas, mediante cálculos matemáticos.



Investigar que son las esporas y su importancia en la reproducción de los hongos.

3. MATERIALES 

Frasco con 90 ml de solución de tween 80 o Tritón al 0.001 %

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Tubos con 9 ml de tween 80 al 2% o Tritón al 0.001%

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Muestra de 10 g o 10 ml del bioinsumo a evaluar,

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Micropipeta de 100 a 1000 gl.

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Puntas esterilizadas.



Cámara de Neubauer.



Microscopio. 4. PROCEDIMIENTO

1. Colocar 90 ml de agua con triton al 0.001% en frascos herméticos. 2. Pesar 10 g/ 10 ml del producto y colocar en el frasco con la solución del dispersante. 3. Dejar reposar la muestra por 1 minuto. 4. Agitar el vortex por 5 minutos. 5. Realizar diluciones seriadas hasta que la muestra no presente concentración excesiva. 6. Agitar la mezcla antes de tomar la muestra para las lecturas. 7. Transferir una alícuota de 20 µ de Neubauer y dejar que se llene por acción capilar. Dejar reposar la muestra por 1 minuto. 8. Observar en el microscopio con lente de 40x y contar las esporas. 9. Realizar el contaje de esporas en los 5 cuadrantes de cada placa. 10. Calcular la concentración de la mezcla con los valores que se ajustan al siguiente calculo: 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 𝐸𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 ∗ 4 ∗ 105 ∗ 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠 = 𝑁ú𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜

5. RESULTADOS

Cuadrantes 1 2 3 4 5

Total esporas 6 6 5 5 3

Fórmula de la Cámara de Neubauer Concentración =

=

Numero de esporas contadas ∗ 4𝑥106 ∗ 𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠 Número de Cuadrados observados

25 ∗ 4000000 ∗ 100 ∗ 0.3125 80

= 125 ∗ 105 Esporas/ gr suelo

6. DISCUSIÓN Según, La cuantificación de la concentración de esporas permite determinar el número de unidades infectivas por unidad de peso o volumen existentes en una formulación. Para esto se utiliza la

cámara Neubauer, la consiste en una placa gruesa con forma de porta, cuya porción central está dividida en tres bandas longitudinales perpendiculares a su eje longitudinal. De ellas,

las dos laterales se encuentra sobreelevadas con respecto de la central en 0.1 mm, y en la central hay grabado un retículo cuadrangular. De esta forma, por medio de diluciones se obtiene el inóculo en la concentración deseada, esto nos ayudó a contar y así poder calcular el número de esporas que existe en muestra.

7. CONCLUSIONES •

Realizamos un conteo de esporas en la cámara de Neubauer.

•

Determinamos el número de esporas, mediante cálculos matemáticos. 

Investigamos que son las esporas y su importancia en la reproducción de los hongos. Las esporas son unidades reproductivas, generalmente haploide y unicelular. La reproducción por esporas permite al mismo tiempo la dispersión y la supervivencia por largo tiempo en condiciones adversas. La espora produce un nuevo organismo al dividirse por mitosis sin fusión con otra célula, produciendo un gametofito pluricelular. La espora es parte importante de los ciclos vitales biológicos de plantas, hongos y algas. El término deriva del Griego Antiguo σπορα, semilla. Las esporas se pueden clasificar según su función, estructura, origen del ciclo vital o por su movilidad.

8. RECOMENDACIONES 

Al mezclar la muestra de cultivo en el agua procurar revolverla bien para que esta libere todas las esporas que se encuentran en ella.



Tener cuidado al colocar el agua en la caja de Neubauer para que esta no se desborde.



Establecer que cuadros se van a contar, preferiblemente los de las esquinas y centro para que sea al azar

9. BIBLIOGRAFÍA 

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Disponible

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http://books.google.com.co/books?id=xpTHXEWG_t8C&pg=PR6&lpg=PR6&dq=Rivera+ 2007+fitopatologia&source=bl&ots=OPRK-4hH_l&sig=PQbPd5o2HFlQeRUwO42Jd3otc8&hl=es419&sa=X&ei=FeITU7a6DIajkQeKzYHACA&redir_esc=y#v=onepage&q=Rivera%2020 07%20fitopatologia&f=true 10. ANEXOS