Clonacion Molecular 246t3m

La clonación molecular es usada en varios experimentos biológicos y aplicaciones prácticas como son la toma de huellas dactilares y la producción de proteínas. Cuando se habla de la clonación molecular se habla de llegar a amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, y esta debe de estar vinculada a un origen de replicación; que en este caso es una secuencia de ADN.

El objetivo de la clonación molecular es aislar un gen o cualquier otra sustancia concreta de ADN y amplificarlo en cantidades suficientes que permitan su estudio. El proceso de la clonación molecular implica la transferencia de una secuencia de ADN de interés a una célula de un microorganismo. A continuación se cultiva el microorganismo para que se reproduzca la secuencia de ADN junto a su propio ADN. Dado que cada microorganismo individual de una colonia procede de una única célula original y contiene el mismo segmento idéntico transferido de ADN, se denomina clon; por su parte todo el proceso de generación de grandes cantidades de la secuencia de interés se llama clonación molecular.

El proceso de clonación molecular consiste en cuatro pasos: 

Fragmentación: Inicialmente, el ADN de interés necesita ser fragmentado para proveer un segmento relevante de ADN de un buen tamaño.

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Ligación: Un procedimiento de ligación se emplea cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector (el vector de clonación). Dicho vector (que generalmente es circular) se convierte en una secuencia lineal utilizando enzimas de restricción, y es incubado con el fragmento de interés bajo las condiciones apropiadas con una enzima llamada ADN ligasa.

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Transfección: Consiste en introducir la secuencia formada dentro de células.

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Selección: Es cuando finalmente se seleccionan las células que han sido transfectadas con éxito con el nuevo ADN.

Primero el ADN de interés tiene que ser aislado de un segmento de ADN de tamaño adecuado. Después, se da el proceso de ligación cuando el fragmento amplificado de inserta en el vector de clonación (son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan insertados. Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta). El vector se linealiza usando las enzimas de restricción y después siguen a incubarse en condiciones adecuadas.

Tras estos dos pasos se produce la transfección dentro de las células, para ello las células transfectadas son cultivadas; este proceso, es el proceso determinante, ya que es la parte en la que vemos si las células han sido transfectadas exitosamente o no.

Al realizar este paso hay que verificar cuales células están transfectadas y cuáles no. Existen vectores de clonación modernos que incluyen marcadores de resistencia a los antibióticos con los que sólo las células que han sido transfectadas pueden crecer. Hay otros vectores de clonación que proporcionan color azul/ blanco cribado. De modo, que la investigación de las colonias es necesaria para confirmar que la clonación se ha realizado correctamente.

Bibliografía: 

Capella VB. ¿Clonar?: ética y derecho ante la clonación humana. Comares. 2000. [citado 25 Feb. 2011]. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Clonaci%C3%B3n

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Voet D., Voet JG. Bioquímica. 3ra Edición. Argentina. Editorial: Editorial Medica Panamericana. 2006. Pág. 109